Übersetzung für "Nested pcr" in Deutsch
This
embodiment
is
occasionally
also
referred
to
as
“nested
PCR”.
Diese
Ausführungsform
wird
gelegentlich
auch
als
"nested
PCR"
bezeichnet.
EuroPat v2
The
two-stage
amplification
is
in
particular
a
nested
PCR.
Die
zweistufige
Amplifizierung
ist
insbesondere
eine
nested-PCR.
EuroPat v2
This
repeated
amplification
can
be
carried
out
with
several
amplification
primers
in
the
form
of
a
nested
PCR.
Diese
mehrfache
Durchführung
kann
mit
verschiedenen
Amplifikationsprimern
in
Form
einer
nested
PCR
durchgeführt
werden.
EuroPat v2
The
product
III
from
the
PCR
reaction
on
the
previous
day
was
used
as
template
DNA
for
the
nested
PCR.
Das
Produkt
III
aus
der
PCR-Reaktion
vom
Vortag
wurde
als
Matrizen-DNA
für
die
Nested-PCR
verwendet.
EuroPat v2
A
problem,
however,
in
the
case
of
a
nested
PCR
in
comparison
to
the
standard
PCR,
is
the
occurrence
of
cross-contamination.
Problematisch
ist
allerdings
bei
einer
nested-PCR
im
Vergleich
zur
Standard-PCR
das
Auftreten
einer
Kreuzkontamination.
EuroPat v2
The
nested
PCR
is
continued
here
in
a
manner
known
from
the
prior
art.
Hier
wird
in
einer
aus
dem
Stand
der
Technik
bekannten
Weise
die
nested-PCR
fortgesetzt.
EuroPat v2
If
the
mRNA
to
be
identified
is
a
weakly
expressed
species,
it
can
be
amplified
again
in
a
nested
PCR
using
an
additional
primer
pair
of
which
one
primer
is
in
turn
directed
against
the
double-stranded
adaptor
sequence
and
an
additional
primer
is
directed
against
an
internal
sequence
of
the
mRNA.
Für
den
Fall,
daß
es
sich
bei
der
zu
identifizierenden
mRNA
um
eine
schwach
exprimierte
Spezies
handelt,
kann
im
Rahmen
einer
nested
PCR
mit
einem
weiteren
Primerpaar,
von
denen
wiederum
ein
Primer
gegen
die
doppelsträngige
Adaptor-Sequenz,
sowie
ein
weiterer
Primer
gegen
eine
interne
Sequenz
der
mRNA
gerichtet
ist,
erneut
amplifiziert
werden.
EuroPat v2
A
second
PCR
(secondary
or
nested
PCR)
was
carried
out
with
the
PCR
products
obtained,
using
the
primer
pairs
AP2/AAIH-GW-F2
(downstream)
and
AP2/AAH-GW-R2
(upstream),
by
which
formation
of
non-specific
PCR
products
can
be
minimized.
Mit
den
erhaltenen
PCR-Produkten
erfolgte
eine
zweite
PCR
(Secondary
or
nested
PCR)
mit
den
Primerpaaren
AP2/AAH-GW-F2
(downstream)
und
AP2/AAH-GW-R2
(upstream),
durch
die
eine
Bildung
von
unspezifischen
PCR-Produkten
minimiert
werden
kann.
EuroPat v2
The
primers
DR1,
DR2
and,
for
the
nested
PCR,
DR4
and
DR5
described
by
Clewley
were
used,
as
well
as
the
temperature
cycles
described
in
this
publication.
Verwendet
wurden
die
von
Clewley
beschriebenen
Primer
DR1,
DR2
sowie
für
die
nested"
PCR
DR4
und
DR5,
ebenso
wie
die
in
dieser
Veröffentlichung
beschriebenen
Temperaturzyklen.
EuroPat v2
Correcting
the
number
of
samples
in
the
table
with
the
35
samples,
which
were
in
contrast
to
the
RT-multiplex-PCR
truly
po-
sitive
in
the
monoplex-RT-PCR
respectively
in
the
nested
PCR
and
adding
likewise
7
further
samples,
which
were
false
positive
in
the
multiplex-PCR,
the
performance
characteristics
are
noticeably
better:
Korrigiert
man
die
Tabelle
um
die
35
Proben,
die
im
Gegensatz
zur
RT-multi-plex
PCR
in
der
monoplex
RT-PCR
oder
in
der
nested
PCR
als
richtig
positiv
de-
klariert
wurden,
und
ebenso
um
7
weite-
re
Proben,
die
in
der
multiplex-PCR
falsch
positiv
waren,
resultiert
eine
deutlich
bessere
Leistungscharakteristik:
ParaCrawl v7.1
Particularly
interesting
also
is
so-called
nested
PCR,
which
is
used,
among
other
things,
for
the
detection
of
particularly
small
DNA
quantities.
Besonders
interessant
ist
auch
die
sogenannte
Nested
PCR,
welche
unter
anderem
zum
Nachweis
besonders
geringer
DNA
Mengen
verwendet
wird.
EuroPat v2
Incubation
of
the
resultant
30-40mer
library
or
of
the
30mer
or
40mer
library
with
new
PCR
reagents
with
addition
of
a
primer
pair,
which
e.g.
only
binds
to
sequences
in
the
hybrid
that
are
at
least
2
fragments
apart
and
therefore
leads
to
a
“nested
PCR”
of
a
longer
fragment
(direct
assembly
and
PCR
amplification
of
a
synthetic
gene
is
known
by
a
person
skilled
in
the
art
from
publications).
Inkubation
der
resultierenden
30-40mer
Library
bzw.
der
30mer
oder
40mer
Library
mit
neuen
PCR-Reagenzien
unter
Zugabe
eines
Primerpaares,
welches
z.B.
nur
an
im
Hybrid
um
mindestens
2
Fragmente
auseinander
liegenden
Sequenzen
bindet
und
somit
zu
einer
"nested
PCR"
eines
längeren
Fragments
führt
(eine
direkte
Zusammenlagerung
und
PCR
Amplifikation
eines
synthetischen
Gens
ist
dem
Fachmann
durch
Publikationen
bekannt).
EuroPat v2
The
Perkin
Elmer
Ampli
Taq®
DNA
polymerase
kit
as
well
as
the
Thermocycler
Gene
Amp®
PCR
system
9700
from
Perkin
Elmer
Applied
Biosystems,
USA,
were
used
to
carry
out
a
nested
PCR
amplification
of
the
surface
antigen.
Es
wurde
eine
sogenannte
nested
PCR
amplification
des
surface
Antigens
durchgeführt,
wobei
der
Perkin
Elmer
Ampli
Taq
®
DNA
Polymerase
Kit
sowie
der
Thermocycler
Gene
Amp
®
PCR
system
9700
der
Fa.
Perkin
Elmer
Applied
Biosystems,
USA
verwendet
wurde.
EuroPat v2
The
PCR
signal
was
increased
via
a
nested
PCR
with
primer
SEQ
ID
No
77
and
primer
UAP
(Invitrogen,
Karlsruhe,
Germany)
with
30
temperature
cycles:
94°
C.
40
sec,
55°
C.
40
sec,
72°
C.
50
sec.
Das
PCR-Signal
wurde
durch
eine
Nest-PCR
mit
Primer
SEQIDNo
77
und
Primer
UAP
(Invitrogen,
Karlsruhe,
Deutschland)
mit
30
Temperatur-Zyklen:
94
°
C
40
Sec,
55
°
C
40
Sec,
72
°
C
50
Sec
verstärkt.
EuroPat v2
The
PCR
signal
was
increased
via
a
nested
PCR
with
primer
SEQ
ID
No
88
and
primer
UAP
(Invitrogen,
Karlsruhe,
Germany)
with
30
temperature
cycles:
94°
C.
40
sec,
55°
C.
40
sec,
72°
C.
1
min.
Das
PCR-Signal
wurde
durch
eine
Nest-PCR
mit
Primer
SEQIDNo
88
und
Primer
UAP
(Invitrogen,
Karlsruhe,
Deutschland)
mit
30
Temperatur-Zyklen:
94
°
C
40
sec,
55
°
C
40
sec,
72
°
C
1
min
verstärkt.
EuroPat v2
PCR
with
primer
combination
III
was
performed
such
that
it
could
be
used
as
a
template
for
nested
primer
PCR
in
the
next
step.
Die
PCR
wurde
mit
der
Primerkombination
III
durchgeführt,
sodass
sie
als
Matrize
für
eine
Nested-Primer-PCR
als
nächsten
Schritt
eingesetzt
werden
konnte.
EuroPat v2
Since
a
PCR
product
was
observed
when
GC
buffer
was
used
but
not
observed
when
only
HF
buffer
was
used
for
primer
combinations
I
and
II,
GC
buffer
was
taken
as
the
preferred
buffer
for
the
nested
PCR.
Da
ein
PCR-Produkt
beobachtet
wurde,
als
für
die
Primerkombinationen
I
und
II
ein
GC-Puffer
verwendet
wurde,
nicht
jedoch,
als
nur
ein
HF-Puffer
verwendet
wurde,
wurde
der
GC-Puffer
als
bevorzugter
Puffer
für
die
Nested-PCR
genommen.
EuroPat v2
The
temperature
of
annealing
was
chosen
to
be
45.4°
C.
for
the
nested
primer
PCR,
as
product
formation
could
be
observed
at
this
temperature.
Die
gewählte
Annealing-Temperatur
betrug
45,4
°C
für
die
Nested-Primer-PCR,
da
bei
dieser
Temperatur
eine
Produktbildung
zu
beobachten
war.
EuroPat v2
In
addition,
the
best
suited
reaction
buffer
for
nested
primer
PCR
was
also
tested
for
the
combination
of
degenerate
PW-3-forward-2
primer
(primer
with
least
degree
of
degeneracy)
and
PW-3-reverse1-short
primer.
Außerdem
wurde
der
am
besten
für
die
Nested-Primer-PCR
geeignete
Reaktionspuffer
ebenfalls
bezüglich
der
Kombination
aus
degeneriertem
PW-3-Vorwärts-2-Primer
(Primer
mit
dem
geringsten
Degenerierungsgrad)
und
PW-3-Rückwärts-1-kurz-Primer
getestet.
EuroPat v2
In
the
second
PCR
(the
first
nested
PCR),
the
DW-ACPN
primer
and
the
target-specific
primer
2
(TSP2)
constructed
by
the
inventors
themselves
were
then
used
to
amplify
the
target
from
the
first
PCR
product.
In
der
zweiten
PCR
(die
ersten
genesteten
PCR)
wurden
dann
der
DW-ACPN-Primer
und
der
von
den
Erfindern
selbst
konstruierte
targetspezifische
Primer
2
(TSP2)
zur
Amplifikation
des
Targets
aus
dem
ersten
PCT-Produkt
eingesetzt.
EuroPat v2
In
the
third
PCR
(the
second
nested
PCR),
universal
primers
and
the
third
target-specific
primer
2
(TSP3)
constructed
by
the
inventors
themselves
were
used
as
was
the
second
PCR
product
as
a
template.
In
der
dritten
PCR
(der
zweiten
genesteten
PCR)
wurden
universelle
Primer
und
der
dritte
von
den
Erfindern
selbst
konstruierte
targetspezifische
Primer
2
(TSP3)
sowie
das
zweite
PCR-Produkt
als
Templat
eingesetzt.
EuroPat v2
Indeed,
a
two-stage
amplification
such
as
the
nested
PCR
in
comparison
to
the
standard
PCR
necessitates
an
additional
technical
and
temporal
outlay.
Zwar
erfordert
eine
zweistufige
Amplifizierung
wie
die
nested-PCR
im
Vergleich
zur
Standard-PCR
einen
zusätzlichen
technischen
und
zeitlichen
Aufwand.
EuroPat v2
As
a
result
of
aerosols
and
other
“accidents”,
the
danger
of
false-positive
results
is
very
high
in
the
case
of
the
nested
PCR.
Durch
Aerosole
und
andere
"Unfälle"
ist
die
Gefahr
für
falsch
positive
Ergebnisse
im
Fall
der
nested-PCR
sehr
hoch.
EuroPat v2
If
the
PCR
sensitivity
obtained
according
to
the
gold
standard
comprising
the
standard
PCR
does
not
suffice,
the
markedly
more
sensitive
nested
PCR
is
performed,
in
which
two
PCR
reactions
are
connected
one
after
the
other.
Genügt
die
nach
dem
Goldstandard
umfassend
die
Standard-PCR
erhaltene
PCR-Sensitivität
nicht,
so
wird
die
deutlich
sensitivere
nested-PCR
(=
geschachtelte
PCR)
durchgeführt,
bei
der
zwei
PCR-Reaktionen
nacheinander
geschaltet
werden.
EuroPat v2
Conclusion:
The
strategy
of
“nested
PCR
bead
cycling”
for
the
preparation
of
HPV16
from
SurePath
medium
shows
a
high
linearity
of
detection
of
cells
employed.
Fazit:
Die
Strategie
des
"Nested
PCR
Bead
Cycling"
zeigt
für
die
Präparation
von
HPV16
aus
SurePath
Medium
eine
hohe
Linearität
des
Nachweises
von
eingesetzten
Zellen.
EuroPat v2