Translation of "Site directed mutagenesis" in German
An
NcoI
site
(5'-CCATGG-3')
was
introduced
around
the
ATG
start
codon
by
site
directed
mutagenesis.
Eine
NcoI-Schnittstelle
(5'-CCATGG-3')
wurde
um
ATG-Startcodon
durch
gezielte
Mutagenese
eingeführt.
EuroPat v2
Plasmid
pKP413GAP
was
subjected
to
site-specific
directed
mutagenesis
in
regard
to
codon
294
of
the
metA
structural
gene.
Plasmid
pKP413GAP
wurde
einer
gerichteten
ortsspezifischen
Mutagenese
betreffend
Codon
101
des
metA-Strukturgens
unterzogen.
EuroPat v2
This
exchange
can
be
performed
by
standard
procedures,
for
example
by
site-directed
oligonucleotide
mutagenesis.
Dieser
Austausch
kann
nach
Standardverfahren
z.
B.
durch
stellengerichtete
Oligonukleotid-Mutagenese
durchgeführt
werden.
EuroPat v2
Point
mutations
can
be
introduced,
via
oligonucleotides,
by
PCR
amplification
(site-directed
mutagenesis).
Über
Oligonukleotide
können
Punktmutationen
durch
PCR-Amplifikation
eingeführt
werden
(Site
Directed
Mutagenesis).
EuroPat v2
The
insulin
derivatives
of
the
formula
II
are
prepared
mainly
by
a
genetic
manipulation
by
means
of
site-directed
mutagenesis
using
standard
methods.
Die
Herstellung
der
Insulin-Derivate
der
Formel
II
erfolgt
hauptsächlich
gentechnologisch
mittels
site-directed
mutagenesis
nach
Standardmethoden.
EuroPat v2
The
insulin
derivatives
of
the
formula
I
are
mainly
prepared
by
genetic
engineering
by
means
of
site-directed
mutagenesis
according
to
standard
methods.
Die
Herstellung
der
Insulin-Derivate
der
Formel
I
erfolgt
hauptsächlich
gentechnologisch
mittels
site-directed
mutagenesis
nach
Standardmethoden.
EuroPat v2
They
can
be
provided
by
known
processes
such
as
for
example
synthetic
processes
or
site-directed
mutagenesis.
Sie
können
durch
bekannte
Verfahren,
wie
beispielsweise
synthetische
Verfahren
oder
ortsgerichtete
Mutagenese
bereit
gestellt
werden.
EuroPat v2
For
this,
the
Phusion
Site
Directed
Mutagenesis
Kit
(F-541,
Finnzymes)
was
used.
Dazu
wurde
der
Phusion
Site
Directed
Mutagenesis
Kit
(F-541,
Finnzymes)
benutzt.
EuroPat v2
Site-directed
mutagenesis
of
the
S282T
substitution
in
replicons
of
8
genotypes
conferred
2-
to
18-fold
reduced
susceptibility
to
sofosbuvir
and
reduced
the
replication
viral
capacity
by
89%
to
99%
compared
to
the
corresponding
wild-type.
Die
gezielte
Mutagenese
der
S282T-Substitution
in
Replikons
von
8
Genotypen
führte
zu
einer
2-
bis
18-fach
geringeren
Empfindlichkeit
gegenüber
Sofosbuvir
und
einer
Verminderung
der
viralen
Replikationskapazität
um
89
%
bis
99
%
im
Vergleich
zum
entsprechenden
Wildtyp.
ELRC_2682 v1
Site-directed
mutagenesis
of
the
Y93H
substitution
in
both
genotype
1a
and
1b
as
well
as
the
Q30R
and
L31M
substitution
in
genotype
1a
conferred
high
levels
of
reduced
susceptibility
to
ledipasvir
(fold-change
in
EC50
ranging
from
544-fold
to
1,677-fold).
Die
gezielte
Mutagenese
der
Y93H-Substitution
in
den
Genotypen
1a
und
1b
sowie
der
Q30R-
und
L31M-Substitution
in
Genotyp
1a
führte
zu
einer
erheblich
geringeren
Empfindlichkeit
gegenüber
Ledipasvir
(Änderung
des
EC50-Wertes
um
das
544-
bis
1.677-fache).
ELRC_2682 v1
Site-directed
mutagenesis
of
the
S282T
substitution
in
replicons
of
8
genotypes
conferred
2-
to
18-fold
reduced
susceptibility
to
sofosbuvir
and
reduced
the
viral
replication
capacity
by
89%
to
99%
compared
to
the
corresponding
wild-type.
Die
gezielte
Mutagenese
der
S282T-Substitution
in
Replikons
von
8
Genotypen
führte
zu
einer
2-
bis
18-fach
geringeren
Empfindlichkeit
gegenüber
Sofosbuvir
und
einer
Verminderung
der
viralen
Replikationskapazität
um
89
%
bis
99
%
im
Vergleich
zum
entsprechenden
Wildtyp.
ELRC_2682 v1
Site-directed
mutagenesis
of
the
S282T
substitution
in
replicons
of
genotype
1
to
6
conferred
2-
to
18-fold
reduced
susceptibility
to
sofosbuvir
and
reduced
the
replication
viral
capacity
by
89%
to
99%
compared
to
the
corresponding
wild-type.
Die
gezielte
Mutagenese
der
S282T-Substitution
in
Replikons
der
Genotypen
1
bis
6
führte
zu
einer
2-
bis
18-fach
geringeren
Empfindlichkeit
gegenüber
Sofosbuvir
und
einer
Verminderung
der
viralen
Replikationskapazität
um
89
%
bis
99
%
im
Vergleich
zum
entsprechenden
Wildtyp.
ELRC_2682 v1
Site-directed
mutagenesis
of
known
NS5A
RAVs
showed
that
substitutions
conferring
a
>
100-fold
reduction
in
velpatasvir
susceptibility
are
M28G,
A92K
and
Y93H/N/R/W
in
genotype
1a,
A92K
in
genotype
1b,
C92T
and
Y93H/N
in
genotype
2b,
Y93H
in
genotype
3,
and
L31V
and
P32A/L/Q/R
in
genotype
6.
Die
gezielte
Mutagenese
von
bekannten
NS5A-RAV
zeigte,
dass
Substitutionen,
die
zu
einer
>
100-fachen
Senkung
der
Velpatasvir-Empfindlichkeit
führten,
M28G,
A92K
und
Y93H/N/R/W
in
Genotyp
1a,
A92K
in
Genotyp
1b,
C92T
und
Y93H/N
in
Genotyp
2b,
Y93H
in
Genotyp
3
und
L31V
sowie
P32A/L/Q/R
in
Genotyp
6
sind.
ELRC_2682 v1
The
affinity
of
antibody
fragments
can
be
further
increased
by
means
of
the
phage-display
technology,
with
new
libraries
being
prepared
from
already
existing
antibody
fragments
by
means
of
random,
codon-based
or
site-directed
mutagenesis,
by
shuffling
the
chains
of
individual
domains
with
fragments
from
naive
repertoires
or
by
using
bacterial
mutator
strains,
and
antibody
fragments
possessing
improved
properties
being
isolated
by
means
of
reselection
under
stringent
conditions.
Die
Affinität
von
Antikörperfragmenten
kann
mittels
der
"phage
display"-Technologie
weiter
erhöht
werden,
wobei
neue
Bibliotheken
von
bereits
existierenden
Antikörperfragmenten
durch
zufällige,
kodonbasierende
oder
gezielte
Mutagenese,
durch
"chain
shuffling"
einzelner
Domänen
mit
Fragmenten
aus
naiven
Repertoires
oder
unter
Zuhilfenahme
von
bakteriellen
Mutatorstämmen
hergestellt
werden
und
durch
Reselektion
unter
stringenten
Bedingungen
Antikörperfragmente
mit
verbesserten
Eigenschaften
isoliert
werden.
EuroPat v2
After
carrying
out
additional
process
steps,
mice
are
obtained
that
cannot
express
a
functional
protein
from
the
start
of
their
development
due
to
the
inactivation
of
both
alleles
of
this
gene
(Thomas,
K.
R.,
Capecchi
M.
R.,
(1987),
Site-directed
mutagenesis
by
gene
targeting
in
mouse
embryo-derived
stem
cells,
Cell
51:
503-512).
Nach
Durchführung
weiterer
Verfahrensschritte
werden
Mäuse
erhalten,
die
aufgrund
der
Inaktivierung
beider
Allele
dieses
Gens
vom
Beginn
ihrer
Entwicklung
kein
funktionelles
Protein
exprimieren
können
(Thomas
K.R.,
Capecchi
M.R.,
(1987),
Site-directed
mutagenesis
by
gene
targeting
in
mouse
embryo-derived
stem
cells,
Cell
51:
503-512).
EuroPat v2
These
gene
products
mentioned
can
be
modified
by
conventional
methods
of
gene
technology,
such
as
site-directed
mutagenesis,
so
that
particular
amino
acids
are
replaced,
additionally
inserted
or
deleted.
Diese
genannten
Genprodukte
können
durch
übliche
Verfahren
der
Gentechnologie
wie
ortsgerichtete
Mutagenese
so
verändert
werden,
daß
bestimmte
Aminosäuren
ausgetauscht,
zusätzlich
eingeführt
oder
entfernt
werden.
EuroPat v2
The
affinity
of
antibody
fragments
can
be
increased
further
by
means
of
the
phage
display
technology,
with
new
libraries
being
prepared
from
already
existing
antibody
fragments
by
means
of
random,
codon-based
or
site-directed
mutagenesis,
by
shuffling
the
chains
of
individual
domains
with
those
of
fragments
from
naive
repertoires,
or
by
using
bacterial
mutator
strains,
and
antibody
fragments
having
improved
properties
being
isolated
by
reselection
under
stringent
conditions.
Die
Affinität
von
Antikörperfragmenten
kann
mittels
der
"phage
display"-Technologie
weiter
erhöht
werden,
wobei
neue
Bibliotheken
von
bereits
existierenden
Antikörperfragmenten
durch
zufällige,
kodonbasierende
oder
gezielte
Mutagenese
durch
"chain
shuffling"
einzelner
Domänen
mit
Fragmenten
aus
naiven
Repertoirss
oder
unter
Zuhilfenahme
von
bakteriellen
Mutatorstämmen
hergestellt
werden
und
durch
Reselektion
unter
stringenten
Bedingungen
Antikörperfragmente
mit
verbesserten
Eigenschaften
isoliert
werden.
EuroPat v2
Four
mutants
were
produced
by
site-directed
mutagenesis
by
carrying
out
targeted
amino
acid
replacements
at
Arg
110
and
Ala
111
.
Mittels
zielgerichteter
Mutagenese
wurden
vier
Mutanten
hergestellt,
indem
gezielte
Aminosäure-Austausche
bei
Arg
110
und
Ala
111
vorgenommen
wurden.
EuroPat v2
The
Gene
Editor™
system
from
Promega
(Mannheim)
was
used
for
the
site-directed
in
vitro
mutagenesis.
Für
die
zielgerichtete
in
vitro
Mutagenese
wurde
das
Gene
Editor
™
-System
der
Firma
Promega
(Mannheim)
verwendet.
EuroPat v2
Yet
a
further
embodiment
of
the
invention
is
a
process
for
the
construction
of
one
of
the
expression
plasmids
according
to
the
present
invention,
wherein
a
DNA
sequence
which
codes
for
the
thrombolytically
active
protein
according
to
the
present
invention
or
a
derivative
thereof
which
contains
further
regions
of
the
t-PA
protein
in
addition
to
the
kringle
II
and
the
protease
domains
is
incorporated
into
a
plasmid
and
those
domains
which
code
for
amino
acids
which
are
not
present
in
the
thrombolytically
active
protein
according
to
the
present
invention
are
deleted
by
site-directed
mutagenesis.
Wiederum
ein
weiterer
Gegenstand
der
Erfindung
ist
ein
Verfahren
zur
Herstellung
eines
der
erfindungsgemäßen
Expressionsplasmide,
das
dadurch
gekennzeichnet
ist,
daS
man
eine
DNA-Sequenz,
die
für
das
erfindungsgemäße
t-PA-Protein
oder
ein
Derivat
davon,
welches
über
die
Kringel
II-
und
die
Protease-Domänen
hinaus
noch
weitere
Bereiche
des
t-PA-Proteins
aufweist,
kodiert,
in
ein
Plasmid
einbringt
und
über
gerichtete
Mutagenese
diejenigen
Bereiche
entfernt,
die
für
Aminosäuren
kodieren,
die
im
erfindungsgemäßen
t-PA-Derivat
nicht
vorhanden
sind.
EuroPat v2